严明 杨欣秀 李臻 平蓓芳 张祖传
摘 要：丝瓜籽毒蛋白luffin-b(LUFb)是毒性极强的植物核糖体失活蛋白，它的cDNA序列已由Kataoka等作了报道，但luffin-b的基因表达至今未见报道。用RT-PCR方法从未成熟的丝瓜籽中克隆了luffin-b的基因(lufB)，并构建了表达载体pET-24a(+)-lufB，pET-24a(+)-lufB转化的大肠杆菌BL21(DE3)用IPTG诱导表达，SDS-PAGE和westem印迹的结果表明重组luffin-b主要存在于包含体中。用逐步透析法对包含体进行了复性，复性产物表现出很强的N-糖苷酶活性，并对兔网织红细胞裂解液的体外蛋白质合成具有较强的抑制活性，其IC50约为125×10-10mol/L。
关键词：丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-b；基因克隆；表达；免疫印迹；包含体；复性
分类号：Q7 文献标识码：A
