王新 屈贤铭 杨胜利
中国科学院上海生物工程研究中心,上海,200233
摘 要：将基因工程菌株E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli 中得到较高水平表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki为8.72×10-8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.
关键词：重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a,高效表达,亲和层析,tPA突变体(NTA)
分类号：Q789,Q503 文献标识码：A
