袁栎 刘丽 赵显玲 王烨 曹颖
空军总医院空军分子生物学中心实验室,北京,100036
摘 要：将编码可溶性人TNFR75(shTNFR75)的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞.甲醇诱导的pPICZαA-shTNFR75/GS115重组酵母工程细胞培养上清,经CNBr活化的TNF-Sepharose4B亲和层析柱纯化,纯化产物纯度为92%;经Westem印迹分析,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别,分子量约为31kD;受体配体结合试验,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同;中和试验显示,该shTNFR75可完全阻断TNF对L929细胞的细胞毒活性.表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力.
关键词：肿瘤坏死因子受体,表达,纯化,活性
分类号：Q75,R392.1 文献标识码：A
