顾善兰 唐建华 张晓杰
中南大学湘雅医学院生物化学教研室,长沙,410078
摘 要：为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)cDNA的结构及功能,应用RT-PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约2.6kb的GPI-PLD cDNA,包含完整阅读框架,编码23个氨基酸的信号肽及817个氨基酸的成熟肽.该cDNA与人胰腺GPI-PLD cDNA几乎百分之百同源,与人肝脏GPI-PLD cDNA同源性为95%,氨基酸同源性为94%,3者对应的结构基因只有1个,位于人类第6号染色体上,基因组序列长约80kb,包括25个外显子.构建克隆的GPI-PLD cDNA的真核表达载体,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)而无GPI-PLD活性的G9细胞,同时设立对照组检测GPI-PLD cDNA的功能.结果显示,对照组细胞几乎检测不到GPI-PLD活性,其表达的PLAP主要位于细胞膜上;而转染GPI-PLD cDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI-PLD活性,而且大部分酶活性存在于培养液中,其表达的PLAP也主要被释放入培养液.结果证实,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI-PLD cDNA有生物学功能,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质.
关键词：骨髓,基质细胞,糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D,cDNA克隆
分类号：Q556+.1 文献标识码：A
