季清洲 康巧华 周妍娇 任宏伟 茹炳根
北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室,北京,100871
摘 要：神经生长抑制因子(neuronal growth inhibitory factor, GIF) 又名金属硫蛋白-III (metallothionein-III, MT-III), 是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质, β结构域为其功能结构域. 为深入系统地研究GIF及其结构域的结构与功能, 构建了神经生长抑制因子功能结构域双体(GIFβ-β). PCR扩增得到N端β结构域和C端β结构域的cDNA, 酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 经发酵、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化, 每升菌液约可得重组GIFβ-β蛋白60 mg. 测其电泳行为、氨基酸组成、质谱、金属巯基含量等, 证明得到了目的蛋白质. 圆二色性图谱显示, GIFβ-β拥有金属硫蛋白家族成员的特征--金属巯基簇结构域. MTT还原法测定神经元抑制活性大小为: GIF>GIFβ-β> GIF β结构域.
关键词：神经生长抑制因子; β结构域; 功能结构域双体; 表达; 功能
分类号：Q51 文献标识码：A
