杨恭 邱并生 魏军亚 刘广超
中国科学院微生物研究所分子病毒与生物工程开放实验室北京 100080
摘 要：番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征.为了对这一致弱特征进行扩展研究,用PCR介导的定点突变技术,对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA),构建了复制酶单突变体--TMV-CVrase,运动蛋白单突变体--TMV-CVmp和复制酶与运动蛋白双突变体--TMV-Cvrase-mp.烟草侵染试验发现,TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp能侵染枯斑(XanthiNC)和系统(K326)寄主,后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状;子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明,TMV-Cvp和TMV-Cvrase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致,具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力,且其基因组仍保持着突变,而复制酶单突变体TMV-Cvrase不能侵染烟草.以上结果表明,复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状,从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究.
关键词：烟草花叶病毒 复制酶运动蛋白 弱化效应 突变体
分类号：S432 文献标识码：A
