人血管内皮生长因子受体配体结合域

马骊（中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所, 广州 510515）
王小宁（中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所, 广州 510515）
张智清（病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100052）
周小明（病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100052）
曾革非（病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100052）
陈爱君（病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100052）

　　利用PCR技术, 从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的人血管内皮生长因子受体(Flt-1)cDNA, 分别含胞外第2、 1-2、 2-3、 1-3个环, 应用酵母双杂交系统对Flt-1的配体结合域进行了研究, 结果表明不仅其胞外1-3 环能与hVEGF₁₆₅结合, 比其更小的片段2-3 环也具有与配体结合的能力。 进一步构建了重组表达质粒pPIC9K/Flt-1(1-3)和pPIC9K/Flt-1(2-3), 转化Pichia pastoris酵母菌GS115, 经摇瓶培养, 甲醇诱导表达。 SDS-PAGE显示, 表达的Flt-1以可溶性分子形式存在于上清中, 诱导4 d的表达量占上清总蛋白质的60%以上。 表达产物经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-100分子筛层析纯化, 纯度达90%以上。 生物学活性检测证实表达的Flt-1(2-3)具有与Flt-1(1-3)比较接近的结合hVEGF₁₆₅的能力和抑制hVEGF₁₆₅对HUVEC的促增殖功能。

生物化学与生物物理学报 2000 Vol.32 No.5 P.463-468