人血管抑制素在酿酒酵母中的分泌表达和活性鉴定
卢文菊（广州医学院临床生物化学教研室,广州,510182）
罗进贤（中山大学生命科学学院,广州,510275）
张晓实（中山医科大学肿瘤研究所,广州,510060）
李文清（中山大学生命科学学院,广州,510275）
摘 要：将酵母交配因子(MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素(hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG1107后,用2%乙醇和2%甘油联合诱导表达.ELISA分析表明,在诱导14 h～30 h期间,hAGN获得了表达并分泌至细胞外.发酵上清液经75%饱和度硫酸铵沉淀、CM-52纤维素离子交换层析和Superdex-75凝胶过滤层析纯化.SDS-PAGE分析显示,表达产物重组人血管抑制素(rhAGN)相对分子质量约50 kD,电泳纯度达到94%.生物活性分析证明,rhAGN在0.01 mg/L～3.0 mg/L浓度范围内能够抑制人真皮内皮细胞株HDMEC增殖,抑制作用随剂量的增加而增强.
关键词：人血管抑制素,酿酒酵母,基因表达与分泌,纯化,活性鉴定
分类号：Q78,R338 文献标识码：A
