动物组织中猪瘟病毒和伪狂犬病毒荧光定量PCR检测技术

生物谷

由武汉大学病毒学国家重点实验室承担的国家“十五”重大科技专项“食品安全关键技术”课题“动物组织中猪瘟病毒和伪狂犬病病毒荧光定量PCR检测技术”研究取得重要进展。通过将PCR技术、荧光能量共振转移和核酸杂交技术相结合，建立了灵敏度高、特异性强、重复性好、能进行高通量病毒核酸定量的检测技术，达到了课题的预期目标，为广泛开展食品安全关键技术中猪瘟病毒和伪狂犬病病毒定量检测技术构建了稳定性、通用性高技术创新平台。

采用数据库序列搜索和同源性分析，选取相应的靶序列，设计出PCR引物和探针，经实验优化、验证和重复实验，建立了猪瘟病毒和伪狂犬病毒荧光定量的PCR检测技术，进行了方法的特异性、敏感性和重复性实验评价。该方法定量检测的线性范围为101-108拷贝病毒核酸分子，最小检测限为10拷贝。与传统病毒检测方法对比研究证实，荧光定量PCR检测技术比传统的病毒分离和生物学试验、电镜观察、免疫荧光技术、补体结合试验、核酸杂交和聚丙烯酰胺凝胶电泳等检测方法的灵敏度提高了2至3个数量级，重复性检测的变异系数CV小于5％。荧光定量PCR检测技术具有耗时短、步骤简单、高通量和定量检测病毒等特点，适用于动物组织中猪瘟病毒和伪狂犬病毒的快速定量检测，实现病毒检测技术的定量化、标准化和科学化。该检测技术已获得国家发明专利1项，申报国家发明专利1项。