生物谷http://www.bioon.com/http://www.bioon.com/rss.asp?ChannelID=14zh-cn生物谷生物谷http://www.bioon.com/images/logo_small.gifhttp://www.bioon.com/http://www.bioon.com/experiment/ge1/313312.shtml...网络公司动态2007-9-23 16:42:28http://www.bioon.com/experiment/protein4/312233.shtml为了更好了解用户使用蛋白纯化实验的相关情况,特做以下调查, 谢谢您的参与!...admin蛋白纯化2007-9-15 23:48:09http://www.bioon.com/experiment/rna10/311820.shtml(一)探针的种类RNA探针是指带有标记的能与组织内相对应的核苷酸序列互补结合的一段单链cDNA或cRNA分子.根据在RNA杂交中所使用的探针依其来源可分为三种:即特异性cDNA,cRNA探针和人工合成寡核苷酸探针.1. 单链cDNA探针: 由于cDNA中不存在内含子及其它高度重复序列,又克服了双链cDNA探针在杂交反应中两条链之间复性的缺点,从而提高了杂交反应的敏感性.但由于单链cDNA探针的制备...adminRNA标记2007-9-6 22:47:13http://www.bioon.com/experiment/rna10/311819.shtml(一)组织的前处理1. 冰冻切片的制备:(1)离体后组织应切成1.5×1.2cm,厚度为0.2cm.(2)立即投入4% 多聚甲醛溶液中(PBS新配制),4℃ 下固定2-4小时.(3)倒去固定液后,加入30% 蔗糖溶液(PBS新配制),4℃ 下过夜, 次日将组织块储存在-80℃ 或-140℃ 超低温冰箱内.(4)或将组织块置于-20℃ 恒冷切片机内切成10μm薄片,粘附于涂有粘附剂的载玻片上置室温下...adminRNA标记2007-9-6 22:43:50http://www.bioon.com/experiment/rna10/311818.shtml(一)细胞的准备,固定和细胞的通透1. 在37℃ 5%CO2大气压下,用涂有多聚左旋赖氨酸的显微载玻片上培养细胞.2. 用37℃ 0.01mol/L PH7.4 PBS漂洗细胞,用福尔马林醋酸固定液 (用0.9% NaCl 配制,内含4% 甲醛,5% 醋酸)常温下固定30min.3. 常温下用0.01mol/L PH7.4 PBC冲洗已固定细胞片,然后将细胞片储存在4℃,70% 酒精内.4. 杂交...adminRNA标记2007-9-6 22:40:15http://www.bioon.com/experiment/rna10/311817.shtml原位杂交技术能在目的细胞和组织中观察基因和分析基因的缺失,增减和变异,使传统的基础医学和临床医学研究推进到基因分子认识水平.尤其是RNA原位杂交已成为最有效的分子工具.从培养细胞检测结果表明,采用荧光素标记探针结合CCD摄录的图象分析处理系统,原位杂交的分辩率已达到1kb靶DNA的灵敏度.而在冰冻和石蜡切片中原位杂交的灵敏度远不如培养细胞,靶DNA仅为40kb,而mRNA为10-20拷贝.如何提高...adminRNA标记2007-9-6 22:38:33http://www.bioon.com/experiment/rna5/311816.shtml1. 总RNA的分离 总RNA分离的方法很多，常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase抑制剂来抑制RNase的活性，同时，异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠（sarcosyl）共同作用可以破坏核蛋白复合体，使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定，因而在整个提取过程中体系始终保持酸性至中性，而在酸性条件下DNA极少发生解离，DNA同蛋白质一起变性后被离心下来，RNA则仍溶...adminRNA提取2007-9-6 22:36:36http://www.bioon.com/experiment/rna5/311708.shtml本制品是一种快速方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。样品在RNAiso Reagent中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层)，RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。RNAiso Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一小...adminRNA提取2007-9-5 22:36:34http://www.bioon.com/experiment/rna5/311706.shtml收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,β-巯基乙醇0.1mol/L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）100m l颠倒混合数秒钟，冰浴15分钟，4℃离心10,000 r/min，15分钟，吸取上清，加入等体积异丙醇...adminRNA提取2007-9-5 22:27:30http://www.bioon.com/experiment/rna5/311707.shtml收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,β-巯基乙醇0.1mol/L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）100m l颠倒混合数秒钟，冰浴15分钟，4℃离心10,000 r/min，15分钟，吸取上清，加入等体积异丙醇...adminRNA提取2007-9-5 22:27:30http://www.bioon.com/experiment/ge1/313311.shtml...网络公司动态2007-9-5 16:41:42http://www.bioon.com/experiment/mob4/311615.shtmlCut 10-20X 10 um sections of formalin fixed paraffin samples into eppendorf tubes. Add 1 ml xylene, mix, incubate at 55 C for 15 mins. Release pressure, spin down for 2 minutes in eppendorf ultramicro...adminDNA提取2007-9-4 20:32:42http://www.bioon.com/experiment/mob4/311614.shtmlThis is a four day procedure so its best to start on Monday or Tuesday.CASE SELECTION:H&E stained thin sections are first reviewed by a pathologist, and areas of interest are outlined. Tissue bloc...adminDNA提取2007-9-4 20:27:30http://www.bioon.com/experiment/mob4/311613.shtmlNOTE: THIS IS FINE FOR SOUTHERNS, BUT NOT FOR SCREENING BY PCR. (from Ruixia, 7/99, from protocol by Stef Oehen 7/94). 1. Put 1 cm tail in 1.5 ml microcentrifuge tube. 2. Add 500µl Tail Buffer a...adminDNA提取2007-9-4 20:25:44http://www.bioon.com/experiment/mob4/311612.shtml1. Remove 0.5 cm of tail into polypropylene microfuge tube (do not mince).(The tubes must have tight-fitting caps, so that there are no leaks in steps 3 and 7 below.) 2. Add 0.5 ml DNA digestion buffe...adminDNA提取2007-9-4 20:16:06http://www.bioon.com/experiment/mob4/311611.shtml1. Obtain tail biopsies from 2 to 3 week old mice: Hold mouse firmly at base of tail with one hand, with the other cut off 0.5 to 1.0 cm of the tail tip with a scalpel or single edge razor blade. 2. A...adminDNA提取2007-9-4 20:10:21http://www.bioon.com/experiment/mob9/311581.shtml磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首...adminDNA转染2007-9-3 21:10:43http://www.bioon.com/experiment/mob9/311579.shtml报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。　　作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在...adminDNA转染2007-9-3 21:08:52http://www.bioon.com/experiment/mob9/311580.shtml报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。　　作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在...adminDNA转染2007-9-3 21:08:52http://www.bioon.com/experiment/mob9/311578.shtml转染方法原理主要应用特点主要的厂家及产品DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时转染相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸钙法磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染,染...adminDNA转染2007-9-3 21:05:15http://www.bioon.com/experiment/cellular12/311576.shtmlThe method we use is based on work of Dr. Hazel Cheng, at the University of Toronto and works for both colon and the small intestine.First we excise the whole colon from cecum to rectum. This is easil...admin特殊细胞培养2007-9-3 21:02:21