方法 采用单克隆抗体夹心酶联免疫吸咐法，对36例上呼吸道感染、32例支气管炎、70例肺炎患儿及45例健康对照组的血、尿进行b型HI外膜蛋白(Hib oMP)抗原的检测，并对70例肺炎患儿的血清进行Hib OMP抗体检测。结果 36例上呼吸道感染患儿中有4例为Hib OMP抗体阳性，32例支气管肺炎患儿中有4例阳性，70例肺炎患儿中有18例为阳性；45例健康对照组中仅1例为Hib OMP抗原阳性。肺炎组抗原检出率高于对照组(c2=10.960,P〈0.01)。70例肺炎中18例Hib oMP抗体阳性。抗原、抗体检测共有24例(包括抗原、抗体均阳性12例，仅抗原或抗体阳性各6例)肺炎获得阳性结果。结论 11.1%的上呼吸道感染、12.5%支气管炎和34.3%的肺炎患儿为Hib感染；抗原、抗体联合检测可使Hib检出率提高。
A study on the relationship between haemophilus influenzae b and acute respiratory
infection Liu Xiuyun, Jiang Zaifang, Yang Yonghong, et al. beijing Children′s Hospital
affiliated to Capital University of Medical Sciences, Beijing 100045
【Abstract】 Objective to study the role of Haemophilus influenzae (HI) in the acute
respiratory tract infection.Methods The Mab-enzyme linked immunosorbent assay was
used to detect Haemophilus influenzae type b outer membrane protein (Hib OMP) antigen
in the serum and urine of 70 cases of pneumonia, 32 cases of brochitis, 36 cases of acute
upper respiratory tract infection, and 45 healthy controls. Patients with pneumonia were
further studied by the assay of Hib OMP antibody.Results eighteen out of 70 cases of
pneumonia, 4 out of 32 cases of bronchitis and 4 out of the 36 cases of acute upper respiratorytract infection were Hib OMP antigen positive. However, only 1 out of 45 healthy controls was Hib OMP antigen positive. The positive rate for Hib antigen in cases of pneumonia was much higher than that of healthy controls (c2=10.960, p〈0.01). By means of Hib OMP antibody assay, 18/70(25.7%) cases of pneunmonia were found positive. A total of24 cases of pneumonia including 12 cases had both positive Hib OMP antigen and its antibody, 6 cases positive Hib OMP antigen only and another 6 positive Hib OMP antibody only were revealed to have HI infection.Conclusion 11.1% of cases of upper respiratory tract infection, 12.5% of cases of bronchitis and 34.3% of cases of pneumonia had Hib infection. A combined application of Hib OMP antibody and antigen detection can enhance the detective rate of Hib infection.
【Key words】 Haemophilus influenzae Acute respiratory tract infections haemophilus infections
流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae, HI)是急性呼吸道感染(ARI)中最常见的细菌病原之一。1984年报道HI在发展中国家小儿急性下呼吸道感染(ALRI)中分离率高达45%［1］，近年来，发展中国家报道HI所致的ARI并不少见［2，3］。国内对ARI的细菌病原学研究相对薄弱，有关在ARI中HI感染的发病情况尚缺乏确切的流行病学资料。为此，我们进行了ARI(包括上呼吸道感染、支气管炎、肺炎)中b型流感嗜血杆菌(Hib)致病情况的研究。
对象和方法
一、研究对象
依制订的临床诊断标准［4］，于1994年12月～1995年5月，在北京儿童医院病房和门诊选择5岁以下(新生儿除外)、起病1周以内的ARI患儿138例。其中，肺炎(包括6例毛细支气管炎)70例，平均年龄1岁6月(2月～5岁)；支气管炎32例，平均年龄为1岁10月(3个月～5岁)；上呼吸道感染36例，平均年龄为2岁(5个月～5岁)。138例患儿中男91例，女47例。患儿组取血前均用抗生素超过24小时。同时选择45例5岁以下(新生儿除外)健康儿童为对照组，男24例，女21例，平均年龄为2岁(4个月～5岁)。
二、标本的收集和处理
1.血：于入院当时或门诊初诊时经严格无菌操作抽取受检者静脉血3ml，放入含有30～50ml HI特殊培养基的瓶内。并立即转至CO2孵箱内培养。同时取2ml静脉血离心，留血清置-30℃冰箱内保存待检。出院时留第2份血清。第1份血清均取自发病3～7天(平均4天)，第2份血清取自起病的2～3周。双份血清间隔时间为7～14天(平均12天)。
2.咽分泌物：于入院当时或门诊初诊时取受检者咽后壁和两侧扁桃体区分泌物，放入含X、V因子的培养基肉汤中做咽分泌物培养［5］。标本在1小时内转入CO2孵箱内，增菌16～18小时，增菌液变混浊后转种至培养皿。
3.尿：收集入院24小时内或初诊当天的尿液30～50ml，置透析袋内用聚乙二醇浓缩25～50倍，置-30℃冰箱保存待检。
三、实验方法
1.细菌培养及鉴定：用含有Levinthol原液的特殊HI培养基进行咽分泌物、血细菌培养，对所得可疑的透明菌落进一步分纯，以卫星试验及X、V因子需要试验来鉴定HI。进一步血清分型采用Hib抗血清、a～f多价抗血清。若与Hib抗血清凝集者为Hib菌株。
2.Hib外膜蛋白(OMP)抗原检测法：采用两种单克隆抗体夹心的酶联免疫吸附法(ELISA)检测Hib OMP抗原。由于单克隆抗体P2-18可识别到目前为止所有的HI，且亲和力较强［6］；P2-4仅可识别Hib菌株［7，8］。两种针对不同抗原决定簇的单克隆抗体联合应用可提高检测的敏感性。因此，选用P2-18作为包被抗体，P2-4作为酶标抗体。对受检者的血、尿进行检测。血或尿任一阳性即为Hib感染证据。
3.Hib OMP抗体测定：采用Scarcosyl方法提取Hib菌的外膜蛋白，以国际标准株6880的OMP与临床分离株C44的OMP进行混合作为包被抗原，用间接ELISA法测定其特异性抗体IgG、IgM。以急性期血清抗体IgM水平高于同年龄±2s及双份血清抗体3倍以上增高为产生抗体反应的阳性标准。抗原或抗体反应任一阳性即为Hib感染。
结 果
一、Hib细菌培养结果
138例ARI患儿中无1例血培养分离出Hib，咽分泌物培养在对照组与患儿组之间Hib的分离率的差异无显著意义(c2=1.039,P＞0.05)。
二、Hib OMP抗原检测结果
经c2检验，各组间Hib oMP抗原检出率的差异具非常显著意义(c2=12.814,P〈
